ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર શું છે?

 

 

ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર એ ફ્લોરોસેન્સ માઇક્રોસ્કોપમાં આવશ્યક ઘટક છે. સામાન્ય સિસ્ટમમાં ત્રણ મૂળભૂત ફિલ્ટર્સ હોય છે: એક ઉત્તેજના ફિલ્ટર, એક ઉત્સર્જન ફિલ્ટર અને ડિક્રોઇક મિરર. તેઓ સામાન્ય રીતે ક્યુબમાં પેક કરવામાં આવે છે જેથી જૂથને માઇક્રોસ્કોપમાં એકસાથે દાખલ કરવામાં આવે.

结构

ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર કેવી રીતે કામ કરે છે?

ઉત્તેજના ફિલ્ટર

ઉત્તેજના ફિલ્ટર ચોક્કસ તરંગલંબાઇના પ્રકાશને પ્રસારિત કરે છે અને અન્ય તરંગલંબાઇને અવરોધે છે. તેનો ઉપયોગ ફિલ્ટરને ટ્યુન કરીને ફક્ત એક જ રંગને મંજૂરી આપવા માટે વિવિધ રંગો બનાવવા માટે કરી શકાય છે. ઉત્તેજના ફિલ્ટર્સ બે મુખ્ય પ્રકારોમાં આવે છે - લાંબા પાસ ફિલ્ટર્સ અને બેન્ડ પાસ ફિલ્ટર્સ. ઉત્તેજક સામાન્ય રીતે બેન્ડપાસ ફિલ્ટર છે જે ફ્લોરોફોર દ્વારા શોષાયેલી તરંગલંબાઇને જ પસાર કરે છે, આમ ફ્લોરોસેન્સના અન્ય સ્ત્રોતોની ઉત્તેજના ઘટાડે છે અને ફ્લોરોસેન્સ ઉત્સર્જન બેન્ડમાં ઉત્તેજના પ્રકાશને અવરોધે છે. આકૃતિમાં વાદળી રેખા દ્વારા બતાવ્યા પ્રમાણે, BP 460-495 છે, જેનો અર્થ છે કે તે માત્ર 460-495nm ના ફ્લોરોસેન્સમાંથી પસાર થઈ શકે છે.

તે ફ્લોરોસેન્સ માઇક્રોસ્કોપના પ્રકાશના માર્ગમાં મૂકવામાં આવે છે અને ફ્લોરોફોર ઉત્તેજના શ્રેણી સિવાય પ્રકાશ સ્ત્રોતની તમામ તરંગલંબાઇને ફિલ્ટર કરે છે. ફિલ્ટર ન્યૂનતમ ટ્રાન્સમિશન છબીઓની તેજ અને તેજ સૂચવે છે. કોઈપણ ઉત્તેજના ફિલ્ટર માટે ઓછામાં ઓછા 40% ટ્રાન્સમિશનની ભલામણ કરવામાં આવે છે જેથી ટ્રાન્સમિશન આદર્શ રીતે >85% હોય. ઉત્તેજના ફિલ્ટરની બેન્ડવિડ્થ સંપૂર્ણપણે ફ્લોરોફોર ઉત્તેજના શ્રેણીની અંદર હોવી જોઈએ જેમ કે ફિલ્ટરની કેન્દ્ર તરંગલંબાઇ (CWL) ફ્લોરોફોરની ટોચની ઉત્તેજના તરંગલંબાઇની શક્ય તેટલી નજીક હોય. ઉત્તેજના ફિલ્ટર ઓપ્ટિકલ ડેન્સિટી (OD) પૃષ્ઠભૂમિની છબીના અંધકારને સૂચવે છે; OD એ એક માપ છે કે ફિલ્ટર ટ્રાન્સમિશન રેન્જ અથવા બેન્ડવિડ્થની બહાર તરંગલંબાઇને કેટલી સારી રીતે અવરોધે છે. ન્યૂનતમ OD 3.0 ની ભલામણ કરવામાં આવે છે પરંતુ 6.0 અથવા તેથી વધુની OD આદર્શ છે.

સ્પેક્ટ્રલ ડાયાગ્રામ

ઉત્સર્જન ફિલ્ટર

ઉત્સર્જન ફિલ્ટર્સ નમૂનામાંથી ઇચ્છનીય ફ્લોરોસેન્સને ડિટેક્ટર સુધી પહોંચવા દેવાનો હેતુ પૂરો પાડે છે. તેઓ ટૂંકી તરંગલંબાઇને અવરોધે છે અને લાંબી તરંગલંબાઇ માટે ઉચ્ચ ટ્રાન્સમિશન ધરાવે છે. ફિલ્ટરનો પ્રકાર સંખ્યા સાથે પણ સંકળાયેલો છે, દા.ત. આકૃતિમાં BA510IF (દખલગીરી અવરોધ ફિલ્ટર), તે હોદ્દો તેના મહત્તમ ટ્રાન્સમિશનના 50% પર તરંગલંબાઇનો સંદર્ભ આપે છે.

ઉત્તેજના ફિલ્ટર્સ માટેની સમાન ભલામણો ઉત્સર્જન ફિલ્ટર્સ માટે સાચી છે: ન્યૂનતમ ટ્રાન્સમિશન, બેન્ડવિડ્થ, OD અને CWL. આદર્શ CWL, ન્યૂનતમ ટ્રાન્સમિશન અને OD સંયોજન સાથેનું ઉત્સર્જન ફિલ્ટર સૌથી ઊંડું શક્ય બ્લોકિંગ સાથે, સૌથી તેજસ્વી શક્ય છબીઓ પ્રદાન કરે છે અને સૌથી ઓછા ઉત્સર્જન સિગ્નલોની તપાસની ખાતરી આપે છે.

ડિક્રોઇક મિરર

ડિક્રોઇક મિરર ઉત્તેજના ફિલ્ટર અને ઉત્સર્જન ફિલ્ટર વચ્ચે 45°ના ખૂણા પર મૂકવામાં આવે છે અને ડિટેક્ટર તરફ ઉત્સર્જન સંકેત પ્રસારિત કરતી વખતે ફ્લોરોફોર તરફ ઉત્તેજના સંકેતને પ્રતિબિંબિત કરે છે. આદર્શ ડિક્રોઇક ફિલ્ટર્સ અને બીમ સ્પ્લિટર્સમાં ઉત્તેજના ફિલ્ટરની બેન્ડવિડ્થ માટે >95% પ્રતિબિંબ અને ઉત્સર્જન ફિલ્ટરની બેન્ડવિડ્થ માટે >90% ટ્રાન્સમિશન સાથે, મહત્તમ પ્રતિબિંબ અને મહત્તમ ટ્રાન્સમિશન વચ્ચે તીવ્ર સંક્રમણ હોય છે. સ્ટ્રે-લાઇટને ન્યૂનતમ કરવા અને ફ્લોરોસન્ટ ઇમેજ સિગ્નલ-ટુ-નોઇઝ રેશિયોને મહત્તમ બનાવવા માટે, ફ્લોરોફોરની આંતરછેદ તરંગલંબાઇ (λ) સાથે ફિલ્ટર પસંદ કરો.

આ આકૃતિમાં ડાયક્રોઇક મિરર એ DM505 છે, તેથી તેનું નામ આપવામાં આવ્યું છે કારણ કે 505 નેનોમીટર આ અરીસા માટે મહત્તમ ટ્રાન્સમિશનના 50% પર તરંગલંબાઇ છે. આ અરીસા માટે ટ્રાન્સમિશન કર્વ 505 એનએમથી ઉપરનું ઉચ્ચ ટ્રાન્સમિશન, 505 નેનોમીટરની ડાબી તરફ ટ્રાન્સમિશનમાં તીવ્ર ઘટાડો અને 505 નેનોમીટરની ડાબી તરફ મહત્તમ પ્રતિબિંબિતતા દર્શાવે છે પરંતુ હજુ પણ 505 એનએમથી નીચેનું ટ્રાન્સમિશન હોઈ શકે છે.

લોંગ પાસ અને બેન્ડ પાસ ફિલ્ટર્સ વચ્ચે શું તફાવત છે?

ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર્સને બે પ્રકારમાં વિભાજિત કરી શકાય છે: લોંગ પાસ (એલપી) અને બેન્ડ પાસ (બીપી).

લાંબા પાસ ફિલ્ટર્સ લાંબી તરંગલંબાઇને પ્રસારિત કરે છે અને ટૂંકા તરંગલંબાઇઓને અવરોધિત કરે છે. કટ-ઓન તરંગલંબાઇ એ પીક ટ્રાન્સમિશનના 50% પરનું મૂલ્ય છે, અને કટ-ઓનથી ઉપરની તમામ તરંગલંબાઇઓ લાંબા પાસ ફિલ્ટર્સ દ્વારા પ્રસારિત થાય છે. તેઓ વારંવાર ડિક્રોઇક મિરર્સ અને ઉત્સર્જન ફિલ્ટર્સમાં ઉપયોગમાં લેવાય છે. જ્યારે એપ્લિકેશનને મહત્તમ ઉત્સર્જન સંગ્રહની જરૂર હોય અને જ્યારે સ્પેક્ટ્રલ ભેદભાવ ઇચ્છનીય અથવા જરૂરી ન હોય ત્યારે લોંગપાસ ફિલ્ટર્સનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ, જે સામાન્ય રીતે પૃષ્ઠભૂમિ ઓટોફ્લોરેસેન્સના પ્રમાણમાં નીચા સ્તરવાળા નમૂનાઓમાં એક જ ઉત્સર્જન કરતી પ્રજાતિઓ પેદા કરતી ચકાસણીઓ માટેનો કેસ છે.

બેન્ડ પાસ ફિલ્ટર્સ માત્ર ચોક્કસ તરંગલંબાઇના બેન્ડને પ્રસારિત કરે છે અને અન્યને અવરોધિત કરે છે. તેઓ ફ્લોરોફોર ઉત્સર્જન સ્પેક્ટ્રમના માત્ર સૌથી મજબૂત ભાગને પ્રસારિત કરવાની મંજૂરી આપીને ક્રોસસ્ટૉક ઘટાડે છે, ઑટોફ્લોરોસેન્સ અવાજ ઘટાડે છે અને આ રીતે ઉચ્ચ પૃષ્ઠભૂમિ ઑટોફ્લોરેસેન્સ નમૂનાઓમાં સિગ્નલ-ટુ-નોઈઝ રેશિયોમાં સુધારો કરે છે, જે લાંબા પાસ ફિલ્ટર્સ ઓફર કરી શકતા નથી.

બેસ્ટસ્કોપ કેટલા પ્રકારના ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર સેટ સપ્લાય કરી શકે છે?

ફિલ્ટર્સના કેટલાક સામાન્ય પ્રકારોમાં વાદળી, લીલા અને અલ્ટ્રાવાયોલેટ ફિલ્ટર્સનો સમાવેશ થાય છે. કોષ્ટકમાં બતાવ્યા પ્રમાણે.

ફિલ્ટર સેટ

ઉત્તેજના ફિલ્ટર

ડિક્રોઇક મિરર

બેરિયર ફિલ્ટર

એલઇડી લેમ્પ વેવ લંબાઈ

અરજી

B

BP460-495

DM505

BA510

485nm

·FITC: ફ્લોરોસન્ટ એન્ટિબોડી પદ્ધતિ

એસિડિન નારંગી: DNA, RNA

ઓરામાઇન: ટ્યુબરકલ બેસિલસ

·EGFP, S657, RSGFP

G

BP510-550

DM570

BA575

535nm

રોડમાઇન, TRITC: ફ્લોરોસન્ટ એન્ટિબોડી પદ્ધતિ

પ્રોપીડિયમ આયોડાઇડ: ડીએનએ

· આરએફપી

U

BP330-385

DM410

BA420

365nm

· ઓટો-ફ્લોરોસેન્સ અવલોકન

·DAPI: DNA સ્ટેનિંગ

હોચેસ્ટ 332528, 33342: રંગસૂત્ર સ્ટેનિંગ માટે વપરાય છે

V

BP400-410

ડીએમ 455

BA460

405nm

· કેટેકોલેમાઈન્સ

·5-હાઇડ્રોક્સી ટ્રિપ્ટામાઇન

ટેટ્રાસાયક્લાઇન: હાડપિંજર, દાંત

R

BP620-650

DM660

BA670-750

640nm

· Cy5

એલેક્સા ફ્લોર 633, એલેક્સા ફ્લોર 647

ફ્લોરોસેન્સ એક્વિઝિશનમાં ઉપયોગમાં લેવાતા ફિલ્ટર સેટ્સ ફ્લોરોસેન્સ એપ્લિકેશન્સમાં ઉપયોગમાં લેવાતી મુખ્ય તરંગલંબાઇની આસપાસ ડિઝાઇન કરવામાં આવે છે, જે સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાતા ફ્લોરોફોર્સની આસપાસ આધારિત છે. આ કારણોસર, તેઓ ઇમેજિંગ માટે બનાવાયેલ ફ્લોરોફોર, જેમ કે DAPI (વાદળી), FITC (લીલો) અથવા TRITC (લાલ) ફિલ્ટર ક્યુબ્સના નામ પરથી પણ નામ આપવામાં આવ્યું છે.

ફિલ્ટર સેટ

ઉત્તેજના ફિલ્ટર

ડિક્રોઇક મિરર

બેરિયર ફિલ્ટર

એલઇડી લેમ્પ વેવ લંબાઈ

FITC

BP460-495

DM505

BA510-550

485nm

ડીએપીઆઈ

BP360-390

DM415

BA435-485

365nm

TRITC

BP528-553

DM565

BA578-633

535nm

FL-Auramine

BP470

DM480

BA485

450nm

ટેક્સાસ રેડ

BP540-580

ડીએમ595

BA600-660

560nm

mCherry

BP542-582

ડીએમ593

BA605-675

560nm

છબીઓ

તમે ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર કેવી રીતે પસંદ કરશો?

1. ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર પસંદ કરવાનો સિદ્ધાંત ફ્લોરોસેન્સ/ઉત્સર્જન પ્રકાશને શક્ય હોય ત્યાં સુધી ઇમેજિંગના અંતમાંથી પસાર થવા દેવાનો છે અને તે જ સમયે ઉત્તેજના પ્રકાશને સંપૂર્ણપણે અવરોધિત કરવાનો છે, જેથી ઉચ્ચતમ સિગ્નલ-ટુ-નોઈઝ રેશિયો મેળવી શકાય. ખાસ કરીને મલ્ટિફોટન ઉત્તેજના અને કુલ આંતરિક પ્રતિબિંબ માઇક્રોસ્કોપના ઉપયોગ માટે, નબળા અવાજ પણ ઇમેજિંગ અસરમાં ભારે દખલ કરશે, તેથી સિગ્નલથી અવાજ ગુણોત્તરની જરૂરિયાત વધારે છે.

2. ફ્લોરોફોરનું ઉત્તેજના અને ઉત્સર્જન સ્પેક્ટ્રમ જાણો. ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર સેટ બનાવવા માટે કે જે કાળી પૃષ્ઠભૂમિ સાથે ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળી, ઉચ્ચ-કોન્ટ્રાસ્ટ ઇમેજ જનરેટ કરે છે, ઉત્તેજના અને ઉત્સર્જન ફિલ્ટર્સે ફ્લોરોફોર ઉત્તેજના શિખરો અથવા ઉત્સર્જનને અનુરૂપ પ્રદેશો પર ન્યૂનતમ પાસબેન્ડ રિપલ સાથે ઉચ્ચ ટ્રાન્સમિશન પ્રાપ્ત કરવું જોઈએ.

3. ફ્લોરોસેન્સ ફિલ્ટર્સની ટકાઉપણું ધ્યાનમાં લો. આ ફિલ્ટર્સ તીવ્ર પ્રકાશ સ્ત્રોતો માટે અભેદ્ય હોવા જોઈએ જે અલ્ટ્રાવાયોલેટ (યુવી) પ્રકાશ ઉત્પન્ન કરે છે જે "બર્નઆઉટ" તરફ દોરી શકે છે, ખાસ કરીને ઉત્તેજક ફિલ્ટર કારણ કે તે પ્રકાશ સ્રોતની સંપૂર્ણ તીવ્રતાને આધિન છે.

વિવિધ ફ્લોરોસન્ટ નમૂનાની છબીઓ

BS-2083F+BUC5F-830CC ની ફ્લોરોસેન્સ છબીઓ
BS-2081F+BUC5IB-830C ની ફ્લોરોસેન્સ છબીઓ

સંસાધનો ઇન્ટરનેટ પર એકત્રિત અને ગોઠવવામાં આવે છે, અને તેનો ઉપયોગ ફક્ત શીખવા અને સંદેશાવ્યવહાર માટે થાય છે. જો કોઈ ઉલ્લંઘન હોય, તો કૃપા કરીને કાઢી નાખવા માટે અમારો સંપર્ક કરો.


પોસ્ટ સમય: ડિસેમ્બર-09-2022